شرکت در کنفرانس بین المللی دراگ دیسکاوری ونکوور کانادا سپتامبر ۲۰۲۳
در این تحقیق، نوعی مکمل دارویی به روش سنتز سبز تولید شد که با نام Nutrition Bio-Shield Superfood (NBS) شناخته میشود. با توجه به اثرات مخرب بیماریهای عفونی، افزایش شیوع آنها و کمبود داروهای مناسب برای درمان، مطالعه حاضر با هدف بررسی خواص ضدمیکروبی مکمل غذایی NBS انجام شد. در ارزیابی تأثیر غلظتهای مختلف بر قطر بازدارنده رشد باکتریهای شایع درگیر در بیماریهای عفونی بدن انسان، بیشترین قطر هاله مربوط به غلظت 100 میلیگرم بر میلیلیتر و کمترین آن مربوط به غلظت 12.5 میلیگرم بر میلیلیتر از مکمل غذایی بود. به طور کلی، مکمل دارویی NBS توانایی افزایش سطح ایمنی بدن انسان را دارد.
مقدمه امروزه داروهای گیاهی و مکملهای غذایی به دلیل در دسترس بودن، هزینه نسبتاً کم، عوارض جانبی کمتر و اثربخشی در درمان بیماریها، به طور گستردهای در سراسر جهان استفاده میشوند. با توجه به اثرات نامطلوب داروهای شیمیایی و عوارض جانبی متعدد گزارششده، این مطالعه با هدف بررسی خواص ضدمیکروبی مکمل دارویی سالم و طبیعی از گندم انجام شد. برای این منظور، این مکمل از طریق روش سنتز سبز تولید و با نام Nutrition Bio-Shield Superfood (NBS) شناخته شد.
روششناسی الف. تهیه مکمل دارویی مرحله اول: ژنوم بذر که شامل مجموعهای از ژنهای درون هسته است، اغلب برای فعالیت پس از زمستان یا شوک سرما آماده میشود. القای شوک به ژنوم سلولها در شرایط نامساعد، پیش از ایجاد شرایط بهینه، اهمیت بالایی دارد. بنابراین، القای شوک سرما در این مرحله از فرآیند فعالسازی ژنوم بسیار مهم است. علاوه بر این، سیستم آنزیمی و هورمونی بذر گیاه میتواند برای آمادهسازی بهتر در شرایط شروع قرار گیرد. بذرها به مدت 10-12 ساعت در دمای 0 تا 5- درجه سانتیگراد نگهداری میشوند تا شرایط نامساعد به ژنوم القا شود.
مرحله دوم: در این مرحله، رطوبت و شوک حرارتی مناسب به سیستم ژنتیکی بذرها اعمال میشود تا شرایط مساعد برای فعالیت آنزیمهای خاص فراهم شود. در این مرحله، سیستم ژنتیکی هسته دانهها شروع به سنتز مواد کرده و تولید پروتئینها و ویتامینها را فعال میکند. این ماده در دمای 20 درجه سانتیگراد و رطوبت 25-18 درصد به مدت 24-48 ساعت نگهداری میشود.
مرحله سوم: در این مرحله باید شرایط با دقت بالا برای تنظیم فشار، رطوبت و اسیدیته فراهم شود تا آمادهسازی به اوج خود برسد و ژنهای بیشتری فعال شوند. مواد معدنی مختلف نیز به عنوان یونهای قابل جذب و فاکتورهای زیستی در سیستم سلولی قرار میگیرند. در این مرحله، بسیاری از ویتامینها سنتز میشوند که منجر به تولید ویتامینهای گروه B و ATP میشود که منابع اصلی انرژی در بدن هستند. در این مرحله رطوبت 30 تا 40 درصد، دما 25 درجه سانتیگراد، اسیدیته 5.8 و مدت زمان 30 ساعت تنظیم میشود.
مرحله چهارم: بذرها در خشککن قفسهای فندار معمولی در دمای 30-35 درجه سانتیگراد به مدت 10-15 ساعت نگهداری میشوند تا رطوبت به 10-15 درصد برسد.
مرحله پنجم: دانهها پس از خشک شدن آسیاب شده و بستهبندی میشوند.
ب. خواص ضد میکروبی 1. سویههای باکتریایی
در این مطالعه، اثر مکمل دارویی NBS بر برخی از باکتریهای گرم مثبت و منفی شایع درگیر در بیماریهای عفونی بدن انسان مورد بررسی قرار گرفت. این باکتریها شامل Streptococcus mutans، Streptococcus sanguinis، Streptococcus salivarius، Streptococcus sobrinus، Escherichia coli، Eikenella corrodens، Pseudomonas aeruginosa، Klebsiella pneumoniae، Candida albicans، Candida glabrata، Candida krusei، Staphylococcus aureus، Enterobacter aerogenes، Citrobacter freundii، Staphylococcus saprophyticus، Staphylococcus epidermidis، Enterococcus faecalis، Proteus mirabilis، Bacillus cereus، و Bacillus subtilis بودند. باکتریها از مرکز جمعآوری میکروارگانیسمهای صنعتی ایران تهیه و جهت بررسی اثرات ضدمیکروبی مکمل به آزمایشگاه میکروبیولوژی شرکت دانشبنیان پژوهشگران داروی سبز منتقل شدند.
2. رقیقسازی عصارهها و تهیه دیسکهای حاوی عصاره
برای ارزیابی فعالیت ضدمیکروبی مکمل، غلظتهای 12.5، 25، 50 و 100 میلیگرم بر میلیلیتر تهیه شد. سپس دیسکهای حاوی عصاره مورد نظر با استفاده از دیسکهای ساخت پادتان طب برای ساخت آنتیبادی تهیه شدند. دیسکها در لولههای حاوی رقتهای عصاره قرار گرفته و پس از جذب کامل، به مدت 3 تا 5 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده شدند تا کاملاً خشک شوند.
3. بررسی فعالیت ضدمیکروبی
فعالیت ضدمیکروبی عصارهها با استفاده از روش دیسک دیفیوژن و حداقل غلظت مهاری (MIC) ارزیابی شد. در این روش، باکتریهایی که در محیط کشت رشد کرده بودند، در سرم فیزیولوژیکی با غلظت 10^8×3 باکتری در میلیلیتر تهیه شدند. سپس 50 میکرولیتر از این سوسپانسیون روی محیط مولر هینتون آگار حاوی 5 درصد خون تلقیح شد. سپس دیسکگذاری انجام شد و سوسپانسیون به مدت 2 روز در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. پس از آن، پلیتها از نظر وجود قطر هاله غیررشدی مورد بررسی قرار گرفتند. دیسکهای استاندارد کلرهگزیدین، نیستاتین و سفالکسین به عنوان کنترل مثبت استفاده شدند. اندازهگیری قطر ناحیه بازدارنده اطراف دیسکها توسط خطکش میلیمتری انجام شد و نتایج مورد ارزیابی قرار گرفتند. علاوه بر روش دیسک دیفیوژن، حساسیت هر یک از سویههای باکتری به عصارههای مورد مطالعه به روش رقیقسازی در محیط مایع روی صفحات 96 چاهی بررسی شد. فقط محیط کشت و سوسپانسیون باکتریایی به صفحات ردیف اول اضافه شد. در ردیفهای بعدی، 100 میکرولیتر از محیط مولر هینتون به هر چاهک اضافه شد. سپس 100 میکرولیتر از غلظتهای مختلف مکمل به چاهکهای مورد نظر اضافه شد. در هر چاهک، 20 میکرولیتر (معادل 0.5 مک فارلند) سوسپانسیون باکتریایی اضافه شد. محتویات هر چاهک به مدت 2 دقیقه با همزن Plate Reader مخلوط شد و صفحات به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار گرفتند. کدورت یا عدم شفافیت چاهکها به صورت بصری ارزیابی شد. اولین چاهکی که کمترین میزان کدورت را نشان داد به عنوان حداقل غلظت کشنده تعیین شد. این آزمایش در سه تکرار جداگانه انجام شد و برای تعیین MIC از میانگین سه تکرار برای هر چاهک استفاده شد.
مرحله اول: بذرها تحت شوک سرما (دمای 0-5 درجه سانتیگراد) برای 10-12 ساعت قرار گرفتند.
مرحله دوم: بذرها تحت شوک حرارتی و رطوبتی برای فعالسازی آنزیمها و تولید پروتئینها و ویتامینها قرار گرفتند.
مرحله سوم: شرایط دقیق فشار، رطوبت و اسیدیته تنظیم شد تا حداکثر سنتز ویتامینها و مواد معدنی انجام شود.
مرحله چهارم: بذرها در دمای 30-35 درجه سانتیگراد برای 15-20 ساعت خشک شدند.
مرحله پنجم: بذرها آسیاب و بستهبندی شدند.
اثر مکمل NBS بر روی باکتریهای مختلف از جمله استرپتوکوکوس موتانس، اشریشیا کلی و استافیلوکوکوس اورئوس مورد بررسی قرار گرفت. فعالیت ضد میکروبی با استفاده از روشهای رقیقسازی و دیسک دیفیوژن ارزیابی شد.
نتایج و بحث قطر هاله غیررشدی ناشی از غلظتهای مختلف مکمل دارویی بر روی برخی از باکتریهای گرم مثبت و منفی شایع درگیر در بیماریهای عفونی بدن انسان در جدول 1 آورده شده است. همچنین میانگین قطر هاله رشد (میلیمتر) در باکتریهای گرم مثبت و منفی شایع درگیر در بیماریهای عفونی بدن انسان با غلظتهای مختلف مکمل غذایی سالم و خوراکی در شکل 1 نشان داده شده است.
دانلود pdf 21CA070063
